抽吸對ELISA洗滌步驟的影響

日期:2022-07-16 04:00
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摘要: 一些參數會影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調整,以降低背景(殘留量)和差異。 殘留液體中包含未結合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉移到下一步的干擾液體也就越少。 吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。 目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭...


       一些參數會影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調整,以降低背景(殘留量)和差異。


       殘留液體中包含未結合的抗原或抗體,它們會增加背景信號。殘留量越小,殘留液體越少,轉移到下一步的干擾液體也就越少。


吸液高度會明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應孔底部的距離稍大,那就會讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應孔底部,那么也會使吸液效率降低,殘留量增加。


       目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動,而剛性洗頭則固定在適當的位置。使用剛性洗頭的洗滌操作在優化起來更為復雜,因為你需要非常仔細地調整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板,那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時,吸頭會降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要,因此洗頭會下降到底部。


      抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔只使用一個抽吸點(這很常見,因為更快),那么抽吸的位置需要優化。*佳的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應孔的中間,即使這是所有洗頭*常見的默認位置。一般來說,*佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。


       如果沒有自動洗板機,采用手工洗滌,那么也需要注意幾點。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時需保證微孔板平放,將洗滌液注滿各孔,但盡量避免漏液溢液,以每孔300 μl為宜;板洗次數一般為3次,要保證洗板的浸泡時間,每次浸泡時間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,推薦每次洗板后進行拍板,并及時更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應孔內。

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