解決qPCR無Ct信號出現現象

日期:2022-07-16 15:54
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摘要: 解決qPCR無Ct信號出現現象: 1、反應循環參數不夠,一般要在35個循環以上,但是過多的循環次數可增加背景值。 2、檢測熒光信號的步驟有誤。SYBRgreen法(SG法)采用的是72延伸時采集熒光信號,taqman法則是在退火結束或延伸結束時進行信號采集。 3、引物或探針降解,可用PAGE電泳檢測其完整性,若是電泳條帶呈彌散狀,可考慮重新合成引物或探針。 4、模板不足或降解,則可以重新提取核酸模板。

解決qPCR無Ct信號出現現象:


1、反應循環參數不夠,一般要在35個循環以上,但是過多的循環次數可增加背景值。


2、檢測熒光信號的步驟有誤。SYBRgreen法(SG法)采用的是72延伸時采集熒光信號,taqman法則是在退火結束或延伸結束時進行信號采集。


3、引物或探針降解,可用PAGE電泳檢測其完整性,若是電泳條帶呈彌散狀,可考慮重新合成引物或探針。


4、模板不足或降解,則可以重新提取核酸模板。

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